單株(Monoclonal)抗體在血清免疫與癌症治療上有很重要的應用，正常人體中產生的抗體為多株(Polyclonal)抗體，以因應各式各樣的入侵病原，但在臨床使用上因為太雜亂，應用有限，現在血清免疫檢驗的發展有很大一部分歸功於單株抗體的分離，1975年 Kohler 和 Milstein 成功融合B細胞與腫瘤細胞，創造出融合瘤，成功大量製備單株抗體。
血清免疫檢驗中，沒有抗體不能解決的，如果有，那就加二級抗體。
單株抗體製備
- 合成 hapten-mimic
- 注入老鼠/兔子等生物體內產生免疫抗體
- 以融合瘤技術產生單株抗體
- 測試單株抗體的敏感度與專一性
- 複製單株抗體產生重組抗體
- 測試重組抗體的敏感度與專一性
- 決定重組抗體序列
- 重組抗體基因改造
融合瘤 HAT 選殖技術
- B細胞具有產生抗體的能力，但是早期的B細胞存活時間很短
- 腫瘤細胞具有"不死化"的特性
製造出融合瘤(Hybridomas)，亦即將B細胞與腫瘤細胞融合，即可創造出可產生抗體也長期存活的細胞。
首先，在腫瘤細胞的部分，將 Myeloma cells 以 8-Azaguanine 處理，創造出 Myeloma cells 缺乏HGPRT(Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase)，B細胞的部分則是將半抗原注射進老鼠體內，使其免疫系統產生對應抗體的B細胞，再取出老鼠腹腔液或脾臟組織，以ELISA/Flow cytometery技術測定抗體效價。
有了兩種細胞，我們便可以利用 polyethylene glycol(PEG) 嘗試融合，我們不會知道融合是否有成功，因此要進行接下來的選殖。
Picture: de nove pathway and salvage pathway
選殖使用的培養基為 HAT medium
- H: Hypoxanthine
- T: Thymidine
- A: Aminopterin(葉酸抑制劑)
葉酸抑制劑會阻斷細胞進行 de nove pathway，強迫其進行 salvage pathway，但是前述提到處理過的腫瘤細胞為HGPRT-，他不能進行salvage pathway，因此在HAT培養基上會死亡，即使是不死化的癌細胞，完全阻斷他的代謝路徑他還是會死的…..
B細胞有進行salvage pathway的能力，當腫瘤細胞與B細胞融合後同時也會得到B細胞的代謝能力，可以在 HAT 培養基上存活。
那沒有融合的純B細胞呢? 他可以利用 HAT 培養基耶，他是不是也會活下來? 不會，純B細胞這東西呢，在體外你給他再多的東西，時間到了他就死了，而且那時間還很短。
綜合以上，會活下來的細胞就是有融合成功的細胞，這步驟就叫選殖，只允許有我們想要的性狀的細胞存活，其他都會死亡，接下來要進行下一步。
確認抗體敏感度與專一性
到這邊我們可以得到能產生抗體又不死的融合瘤細胞，但是我們要進一步了解他到底產生的抗體是不是我們想要的，我們可以再將融合瘤細胞打進老鼠體內擴增，或是試管中細胞培養都可以，濃度擴增後再用 EIA 或Western blotting 篩選有我們想要的專一性抗體，最後再進行基因定序確定序列。
單株抗體技術演進與命名
現在的單株抗體已經可以分為很多種，常見以下這幾種
- 100%老鼠抗體：Murine monoclonal Ab
- 30%老鼠+70%人類抗體：Chimeric(嵌合) monoclonal Ab
- 5-10%老鼠+90-95%人類抗體：Humanized(仿人類) monoclonal Ab
- 100%人類抗體：Human monoclonal Ab
各種單株抗體命名是有規則的，當初藥理學如果知道這套規則應該會好讀很多@@
- 結尾皆是
-mab，意即 monoclonal antibody -u-，表示為人類單株抗體-zu-，表示為仿人類單株抗體-xi-，表示嵌合單株抗體-o-，老鼠單株抗體-a-，大鼠單株抗體-e-，倉鼠單株抗體-i，靈長類單株抗體- etc…..
其他包含作用位置
-tu(m)-：通用-ma(r)-: 乳房-pr(o)-: 前列腺-co(l)-: 大腸-ci(r)-: 循環系統
如 Bevacizumab，表示他是作用在循環系統的仿人類單株抗體。
單株抗體應用
- 基礎研究
- 血清免疫檢驗
- 病理免疫染色
- 標靶抑制癌細胞
- 標靶誘導免疫系統摧毀癌細胞
- 活化T細胞
- 等等一大堆